这是一种在薄层色谱分析和纸色谱分析中非常经典的专用显色剂，主要用于检测和显色还原糖。

1. 基本原理

该显色剂的显色原理基于还原糖在加热条件下发生的脱水、聚合和缩合反应：

1.     脱水：还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等，含有游离醛基或酮基）在酸性条件下加热，会脱水形成糠醛或其衍生物（如羟甲基糠醛）。

2.     显色反应：生成的糠醛类化合物与显色剂中的苯胺发生缩合反应，生成具有特定颜色的席夫碱类化合物。

3.     颜色：最终在薄层板或滤纸上形成有色斑点。不同还原糖产生的颜色可能略有差异（如棕红色、粉红色等），但总体为红棕色系。

2. 试剂组成

·         溶剂：通常是水饱和的正丁醇。正丁醇是有机相，能溶解糖类并推动其在色谱上展开；水饱和是为了维持一定的极性。

·         显色成分：

o    邻苯二甲酸：提供酸性环境，催化还原糖的脱水反应。

o    苯胺：与脱水产物（糠醛）发生显色反应的关键试剂。

·         典型配方：

o    0.93克苯胺

o    1.66克邻苯二甲酸

o    溶解于100毫升水饱和的正丁醇中。

o    （配方比例可能有细微变化，但核心成分不变）

3. 使用方法（以TLC为例）

1.     点样与展开：将含有样品的溶液点在薄层板上，放入展开缸中用合适的溶剂系统（如正丁醇:冰乙酸:水 = 4:1:5，上层有机相）展开。

2.     干燥：取出薄层板，彻底晾干，以去除展开剂中的酸和水分。

3.     显色：

o    喷雾法：将苯胺-邻苯二甲酸试剂均匀喷洒在干燥的薄层板上。

o    浸渍法：将薄层板快速浸入试剂中。

4.     加热显色：将喷洒或浸渍后的薄层板放入105-110°C的烘箱中加热5-10分钟。加热是显色的关键步骤，能加速还原糖的脱水反应。

5.     观察：加热后，还原糖的斑点会显现出红棕色或棕褐色。非还原糖（如蔗糖）在此条件下一般不显色或颜色极浅。

4. 特点与应用

·         专一性：对还原糖具有较好的选择性，是糖类分析的经典方法。

·         灵敏度：灵敏度较高，可检测微克级的还原糖。

·         应用领域：

o    食品分析：检测果汁、蜂蜜、加工食品中的糖分组成。

o    生化研究：分析寡糖、多糖水解产物。

o    植物化学：检测植物提取物中的单糖和低聚糖。

o    质量控制：在制药和食品工业中监控糖类成分。

5. 注意事项

·         毒性：苯胺有毒且可能致癌，配制和使用时应在通风橱内操作，并佩戴手套、口罩等防护用品。

·         稳定性：试剂最好现配现用，或储存于棕色瓶中，避光冷藏。苯胺易氧化，久置会变色失效。

·         加热控制：加热温度和时间需严格控制。温度过低或时间过短，显色不完全；温度过高，可能导致背景变深或斑点炭化。

·         干扰：某些非糖类物质（如抗坏血酸）也可能产生类似反应，需结合色谱的Rf值和其他方法进行确认。

总结

苯胺-邻苯二甲酸显色剂是一种高效、经典的还原糖专属显色剂，其核心是通过酸性加热使还原糖脱水，再与苯胺缩合产生颜色。它在糖类色谱分析中扮演着重要角色，尽管存在试剂毒性的缺点，但其显色效果明确，至今仍被广泛使用。