产品简介
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。
操作步骤(仅供参考)：
1、 还原糖的提取：
2、 总糖的水解和提取：
3、 制作葡萄糖标准曲线：取干净离心管或试管，按下表进行操作，以0号调零，检测540nm处吸光度，以吸光度值为纵坐标，各标准浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线。
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加入物质(ml) |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
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Glu标准(1mg/ml) |
0 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
1 |
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蒸馏水 |
1 |
0.8 |
0.6 |
0.4 |
0.2 |
0 |
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DNS试剂 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
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沸水浴中5分钟后取出，流水冷却至室温 |
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蒸馏水 |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
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相当于葡萄糖量 |
0 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
1 |
4、还原糖测定：取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液1ml，分别加入DNS试剂2ml，其余操作同标准曲线的操作，540nm处测定各管的吸光度。
计算：
还原糖的百分含量：
还原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100
总糖的百分含量：
总糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
注意事项：
1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、 待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
3、 如果样品还原糖浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
4、 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用，×0.9是为了从测定出的总糖水解成单糖中，扣除水解时所消耗的水量。
