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发布日期:2021/2/24 8:33:00

一、什么是琼脂糖凝胶

琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖,琼脂糖的熔点在6265°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。

二、琼脂糖凝胶用途

琼脂糖凝胶可以用于生化、医学研究领域。在生化上可作为凝胶电泳的支持物和亲和层析的载体,在医学上还可用于研究病毒嗜菌体、细菌、临床检验、生化分析、蛋白质、核酸、抗原、抗体,以及多糖的分离、提纯及药物的制备。

做一个完美的琼脂糖凝胶图,缓冲液的选择很重要。

三、如何选择合适的缓冲液

最常用的缓冲液是TAE缓冲液和TBE缓冲液。一般来说,实验室通常选择这两者中的其中一种缓冲液,所以了解两个缓冲液之间的区别对您的实验是非常重要的,那么如何区分这两个缓冲液呢:

1.TAE是Tris-乙酸,缓冲容量小,但是溶解度大,易于储存;TBE是Tris-硼酸,缓冲容量大,但是溶解度小,不易长期储存,易产生沉淀。

2.TAE适合较大的DNA片段,而TBE适合较小的DNA片段。

3.如果凝胶运行时间长,建议使用TBE。如果您计划将DNA用于任何下游应用,则建议您使用TBE。

4.TAE易于储存,更加稳定,而TBE几周内会出现沉淀。

四、新鲜的缓冲液

选择好缓冲液后,准备一份从未使用过的缓冲,新鲜的小份缓冲液,可以储存5倍或10倍的缓冲液等,但使用前一定要稀释。使用新鲜的缓冲液,用于制备凝胶.实验结果会变得更清晰,条带更均匀。

五、缓冲液的温度把控

正所谓慢工出细活,制作活琼脂糖凝胶一定要有耐心。凝胶运行电泳电压应在75V以下,缓冲液不要过热。缓冲液的温度是是造成条带不清晰、不均匀的主要原因之一。为了防止缓冲液出现过热的情况,在运行前,可以将缓冲液或凝胶冷却,或在冷藏室运行凝胶。

来源:快资讯

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