目前微生物基因编辑主要采取传统的CRISPR/Cas9两种技术手段和同源重组(homologous recombination)。

CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。

同源重组是指发生在姐妹染色单体(sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。以基因敲除为例，在微生物基因敲除中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体转化到靶微生物后，外源的重组载体与靶微生物中相同的片段会发生同源重组，从而实现靶基因的敲除。

技术流程

同源重组方法进行基因敲除:根据客户提供的信息，设计用于敲除靶基因的序列(上下游1000bp左右)-----构建用于靶基因敲除的同源重组质粒---转化宿主感受态细胞，用抗性标记筛选靶基因敲除菌株，并进行PCR测序验证----去除标记，反向筛选无抗性标记的菌株，并进行PCR测序验证---挑选1株独立的菌株(菌株权归甲方)，验证后交付

应用范围

根据技术划分:

① 同源重组方法进行基因组编辑:大肠杆菌、链霉菌(PCR-targeting)、分枝杆菌(耻垢分枝杆菌、牛分枝杆菌、鸟分枝杆菌、海分枝杆菌、结核分枝杆菌等)、白色念珠菌等;

② CRISPR/Cas9:大肠杆菌、沙门氏菌、链霉菌(含模式天蓝色链霉菌和常见的链霉菌)、产溶剂梭菌(及其它常见的梭菌)、枯草芽孢杆菌(需咨询)、酿酒酵母、解脂耶氏酵母(需咨询)、丝状真菌(需咨询)。

根据目的划分:

① 过表达;

② 定点突变;

③ 定点插入外源序列。

客户提供

靶微生物，对于培养条件特殊的物种，还需提供培养所需的试剂。

最终交付

载体构建测序报告和图片;

阳性靶基因敲除株PCR检测凝胶电泳图;

包含大致实验步骤、部分可以展示的实验结果的结题报告;

阳性单克隆突变株。

服务周期

1.5-3个月，物种和目的不同，周期不同。

来源：快资讯