样品前处理

将血浆样品以3000 转/min低速离心5 min，精密吸取血浆样品400 μL至2 mL EP管中，加入乙腈去蛋白剂1000 μL， 涡旋振荡1 min，再以14500 转/min高速离心8 min， 然后取上层清液1000 μL 至进样瓶中待测，进样量为300 μL，采用外标工作曲线法进行定量分析。

系统结构

流动相

第一维流动相：甲醇/乙腈/水（25 mmol/L磷酸铵盐水溶液）= 1/3/3(V/V/V)，0.7 mL/min。

第二维流动相：水（25 mmol/L磷酸铵盐水溶液）/水（1.0 mmol/L磷酸氢二铵溶液）/甲醇/乙腈= 10/35/10/45(V/V/V/V)，1 mL/min。

辅助流动相：纯水。

线性和灵敏度

对0.06、0.32、0.79、2.14、4.92、12.31 μg/mL的两性霉素B基质标准液进行分析，以峰面积（y）对质量浓度(x，μg/mL)进行线性回归，得线性方程为y = 683050x + 0，r为0. 999 9， 相关性良好。

方法检出限(S/N= 3）为0.01 μg/mL，定量限(S/N= 10）为 0.04 μg/mL。

精密度和准确度

在0.40、2.00、8.00 μg/mL三个加标水平下，5个平行试验的检测方法回收率在98.79% ~ 99.39%之间，提取回收率在98.50% ~ 99.00%之间，RSD＜3.00%。

色谱图

标准谱图

色谱峰

两性霉素B (6.5min)

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