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发布日期:2024/6/30 10:40:00

样品前处理

将血浆样品以3000 转/min低速离心5 min,精密吸取血浆样品400 μL至2 mL EP管中,加入乙腈去蛋白剂1000 μL, 涡旋振荡1 min,再以14500 转/min高速离心8 min, 然后取上层清液1000 μL 至进样瓶中待测,进样量为300 μL,采用外标工作曲线法进行定量分析。

系统结构

流动相

第一维流动相:甲醇/乙腈/水(25 mmol/L磷酸铵盐水溶液)= 1/3/3(V/V/V),0.7 mL/min。

第二维流动相:水(25 mmol/L磷酸铵盐水溶液)/水(1.0 mmol/L磷酸氢二铵溶液)/甲醇/乙腈= 10/35/10/45(V/V/V/V),1 mL/min。

辅助流动相:纯水。

 

线性和灵敏度

对0.06、0.32、0.79、2.14、4.92、12.31 μg/mL的两性霉素B基质标准液进行分析,以峰面积(y)对质量浓度(x,μg/mL)进行线性回归,得线性方程为y = 683050x + 0,r为0. 999 9, 相关性良好。

方法检出限(S/N= 3)为0.01 μg/mL,定量限(S/N= 10)为 0.04 μg/mL。

 

精密度和准确度

在0.40、2.00、8.00 μg/mL三个加标水平下,5个平行试验的检测方法回收率在98.79% ~ 99.39%之间,提取回收率在98.50% ~ 99.00%之间,RSD<3.00%。

 

色谱图

标准谱图

色谱峰

两性霉素B (6.5min)

 


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